达文西于1503至1507年间一直在创作《蒙娜丽莎》这幅画作。

有一种说法是，画作或许是画中人的丈夫弗朗切斯科．德尔．焦孔多委托达文西而作，以赞颂她的美貌、品德，以及作为富裕丝绸商人妻子的身份。然而，达文西在画这幅肖像画时寄托了更宏大的愿景：他希望赋予《蒙娜丽莎》生命，使观者仿佛能在眼前感受到她的存在，甚至能触及她的思绪。画作创作结束之后，达文西也未将其交给委托人。此后一直将画作留在身边，长达10几年间不断修改，甚至直到他过世前都在调整。达文西过世后，画作一度成为法国皇室收藏，自1797年以来便一直在巴黎罗浮宫展出。

1911年，这幅在法国罗浮宫展出的《蒙娜丽莎》被偷窃，1913年才寻回。今次展厅的第三部分，则以多媒体方式呈现了这一失窃事件。《蒙娜丽莎》曾丢失的经历，令画作备受海内外关注，令其影响力进一步传递到世界各地，掀起了持续到今日的“蒙娜丽莎热”。